к.х.н., старший научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов
лаборант-исследователь отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов
младший научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов
д.м.н., заместитель директора по научно-образовательной работе
д.м.н., доцент, врач Лабораторного центра
Goal. Production of a recombinant T. pallidum antigen Tp0453 and the evaluation of the efficacy of its clinical use for syphilis diagnosis. Materials and methods. To produce the target recombinant T. pallidum antigen, a Tp0453 protein coding fragment of the DNA of the causative agent of syphilis, was cloned into the pET28а vector. Heterological expression of the recombinant T. pallidum antigen was performed in the E. coli BL21 (DE3) strain. The recombinant Tp0453 six-histidine-tagged protein was purified by the metal-chelate affinity chromatography. The resulting homogenous recombinant T. pallidum Tp0453 protein was used to reveal specific IgG antibodies in the serum of syphilis patients using a microarray technology. Results and conclusion. The use of the resulting recombinant protein enabled authors to reveal anti- T. pallidum antibodies in the blood serum of patients suffering from syphilis (primary, secondary, early and late latent syphilis). None of the uninfected controls had a significant reactivity to the recombinant Tp0453. These data allow to propose, that the recombinant protein Tp0453 show promise for laboratory diagnosis of syphilis. The introduction of Tp0453 antigen into the test systems for diagnosis of syphilis (ELISA, immunoblotting or microarray) increases the potential of serodiagnosis of this disease due to the broader range of the revealed antitreponemal antibodies.
Цель. Получение нового рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 и изучение эффективности его клинического использования при диагностике сифилиса. Материал и методы. Для получения целевого рекомбинантного антигена T. pallidum фрагмент ДНК возбудителя сифилиса, кодирующий белок Tp0453, был клонирован в вектор pET28а. Для наработки полученной генетической конструкции вектор вводили в штамм E. coli Top10, отбирая канамицин-устойчивые колонии. Специфичность клонирования подтверждена методом секвенирования по Сенгеру. Гетерологическую экспрессию рекомбинантного антигена T. pallidum проводили в штамме E. coli BL21 (DE3). Очистка рекомбинантного варианта белка T. pallidum Tp0453, содержащего дополнительную последовательность из 6 остатков гистидина на N-концевом участке молекулы, осуществлялась методом металл-хелатной хроматографии. Полученный гомогенный рекомбинантный белок T. pallidum Tp0453 был использован в качестве антигена для выявления специфических IgG к исследуемому белку в сыворотке больных сифилисом с использованием иммунологического биочипа. Результаты и заключение. Применение полученного рекомбинантного белка позволило выявить антитела к T. pallidum в сыворотке крови больных сифилисом (первичным, вторичным, скрытым ранним и поздним). При исследовании сыворотки крови, полученной от здоровых доноров, антитела не обнаруживались. На основании приведенных данных можно сделать вывод о возможности использования полученного рекомбинантного белка в качестве дополнительного антигена для диагностики сифилиса. Включение нового антигена в тест-системы для диагностики сифилиса (в формате иммуноферментного анализа, иммуноблоттинга или иммуночипа) расширяет возможности серологической диагностики данного заболевания за счет увеличения спектра определяемых антител к T. pallidum.