Determination of class M and G antibodies to T.pallidum antigens in patients with primary syphilis

Abstract


The authors present the results of a study of blood serum samples obtained from patients with clinically diagnosed primary syphilis by the linear immunoblotting method to determine IgM and IgG antibodies to T. pallidum antigens, which enabled the authors to study the intensity of the humoral immune response to individual T. pallidum antigens at early stages of the infection. The humoral response by means of the synthesis of specific class M antibodies in case of primary syphilis was accompanied by the formation of Class G antibodies in most cases; the frequency of revealing Class M and G antibodies was as follows: TmpA antigen 100 and 98.68%; TpN47 90.79 and 97.37%; TpN17 90.79 and 89.47%; TpN 15 72.37 and 73.69% of all cases, respectively; the content of class G antibodies to each of the four T. pallidum antigens exceeded the levels of Class M antibodies by more than twice. Different profiles of the humoral immune response with the involvement of IgM and IgG antibodies distinguished by a more expressed synthesis of antibodies to any or several of T. pallidum antigens were discovered and characterized for the first time. The clinical sensitivity of the IgM immunoblotting method for diagnosing primary syphilis amounted to 85.53%, IgG immunoblotting 92.11%, which means that the method can be used to diagnose early forms of syphilis.

Full Text

Реакции адаптивной защиты у человека при инфекционных заболеваниях бактериальной природы осуществляются с преимущественным участием гуморального звена иммунитета, эффекторным проявлением которого служит синтез антител. Антитела к одному и тому же антигену могут относиться к иммуноглобулинам разных классов [1, 2]. Многочисленными исследованиями показано, что на ранних этапах развития бактериальных инфекций у человека осуществляется выработка антител, относящихся преимущественно к иммуноглобулинам класса M, а по мере развития патологического процесса происходит постепенное включение механизмов образования антител классов G и А; при этом напряженность гуморального иммунного ответа с участием антител класса G выражена значительно сильнее, чем первоначальная реакция на чужеродные антигены с участием антител класса M [2-5]. Сифилис является бактериальной инфекцией, вызываемой бледной трепонемой Treponema pallidum. В структуре возбудителя сифилиса выявлено содержание большого количества соединений, обладающих выраженными антигенными свойствами для иммунной системы человека [6-9]. Часть высокоспецифичных для T. pallidum антигенов, к числу которых относятся TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA, хорошо изучена и в настоящее время используется в лабораторных имму-нохимических исследованиях для выявления в биологических образцах (сыворотке и плазме крови или цереброспинальной жидкости) обследуемых лиц соответствующих антител, что играет важную роль при диагностике сифилиса [4, 10-15]. Результаты иммунохимических исследований (иммуноферментный анализ, реакция непрямой агглютинации, реакция иммунофлюоресценции) в подавляющем большинстве случаев оценивают и интерпретируют по выявлению суммы антител к нескольким антигенам возбудителя заболевания одновременно [10-13]. В то же время некоторые из современных медицинских технологий (линейный иммуноблоттинг, исследование с использованием сенсибилизированных калиброванных микросфер и белковых микрочипов) позволяют определять антитела к отдельным антигенам T. pallidum дифференцированно и оценивать участие каждого из них в формировании гуморального иммунитета, а также клиническую значимость для диагностики заболевания [13-20]. В доступной научной литературе нами не выявлено сведений о сроках и очередности появления антител разных классов к разным антигенам T. pallidum, используемым в составе современных диагностических наборов реагентов для иммуноблоттинга, а также о сравнительной оценке их иммуногенности на ранних этапах развития сифилиса и долевом участии в общем иммунном ответе. Целью настоящего исследования явилось определение частоты обнаружения антител классов М и G к отдельным антигенам T. рallidum и выявление особенностей развития гуморального иммунного ответа у больных первичным сифилисом. Материал и методы Исследовано 76 образцов сыворотки крови, полученных от больных с установленным клиническим диагнозом сифилиса первичного независимо от локализации первичного аффекта. Основанием для установления диагноза служили: наличие клинических проявлений заболевания, прямое обнаружение возбудителя и/или данные серологического обследования пациентов в соответствии с действующими протоколом ведения больных «Сифилис» и Клиническими рекомендациями Российского общества дерматовенерологов и косметологов [21, 22]. Все образцы сыворотки крови больных сифилисом были предварительно изучены в иммуноферментном анализе (ИфА) с наборами реагентов «ИфА-АНТИ-ЛЮИС-М», тест-система иммуноферментная для выявления антител класса М к возбудителю сифилиса по ТУ 9398-201-05941003-2012 (РУ № РЗН 2013/126 от 26.02.2013 г.; производства ООО «НпО «Диагностические системы», Россия). В составе иммуносорбента для выявления антител в указанном наборе реагентов используются антигены T. pallidum с молекулярной массой 17, 41 и 47 кД. Учет результатов ИфА и оценку содержания антител в образцах осуществляли в соответствии с инструкцией к набору по показателю коэффициента позитивности (Кп), который представляет собой отношение оптической плотности в реакционной лунке с исследуемым образцом к величине оптической плотности критической. Дифференцированное определение антител классов М или G к разным антигенам T. pallidum проводили методом линейного иммуноблоттинга (Western blot) с набором реагентов «Лайн-Блот Сифилис», тест-система для выявления антител к отдельным антигенам возбудителя сифилиса методом иммунного блот-тинга с использованием рекомбинантных антигенов» (комплект № 1 «Лайн-Блот-Сифилис-IgG» для выявления антител класса G к T. pallidum и комплект № 2 -«Лайн-Блот-Сифилис-IgM» для выявления антител класса М к T. pallidum) по ТУ 9398-118-70423725-2012 (проходит регистрацию в Российской федерации; производство ЗАО «ЭКОлаб», Россия). Указанные комплектации набора реагентов «Лайн-Блот Сифилис» предназначены для раздельного определения антител к четырем рекомбинантным белкам, являющимся аналогами антигенов возбудителя сифилиса: TpN15, TpN17, TmpA и TpN47. полуколичественный учет результатов исследования в иммуноблоттинге осуществляли в соответствии с указаниями инструкции по применению набора в цифровом выражении в ус 66 к № 4, 2013 ловных единицах: минусы отрицательные (отсутствие окрашивания полос в местах нанесения на ни-троцеллюлозный стрип антигенов T. pallidum) и плюсы (от 0,5+ до ++++) положительные результаты (при окрашивании полос с той или иной интенсивностью в местах нанесения антигенов T. pallidum). По итогам исследования в иммуноблоттинге представляли общее заключение: отрицательный результат в случае, если ни с одним из четырех антигенов не получали интенсивности окрашивания полос, равной или превышающей 0,5+ только к одному из антигенов; положительный результат при выявлении антител и проявлении окрашивания с интенсивностью, равной; неопределенный результат при выявлении антител и проявлении окрашивания с интенсивностью, равной или превышающей 0,5+ только к одному из антигенов; положительный результат при выявлении антител и проявлении окрашивания с интенсивностью, равной или превышающей 0,5+ к двум и более антигенам. Для статистической обработки результатов полу-количественного определения антител с интенсивностью менее 0,5+ нами дополнительно введено обозначение 0,3+. Обозначавшее обнаружение следовых количеств антител и низкую интенсивность окрашивания полос с антигенами T. pallidum. Данное обозначение не используется производителем наборов реагентов, применение этого обозначения не изменяло формулировку общего заключения по результатам исследования образца крови в иммуноблоттинге. Результаты и обсуждение Определение специфических антител класса M к T. pallidum Исследование 76 образцов сыворотки крови больных первичным сифилисом в ИФА|дМ позволило определить специфические антитела класса М к антигенам T. pallidum в 74 (97,37%) случаях и их отсутствие в 2 (2,63%) случаях. Показатели КП, рассчитанные для всех положительных образцов, варьировали от 1,20 до 22,18 (M ± m =12,42 ± 0,62): с 5 образцами сыворотки крови они определялись в низкой (1,20 < КП < 3,98), с 15 в средней (4,30 < КП < 7,69) и с 54 образцами в высокой концентрации (8,03 < КП < 22,18). Значения КП с 2 образцами, показавшими отрицательные результаты исследования в ИФА|дМ, составили 0,97 и 0,03 соответственно. Изучение 76 образцов сыворотки крови больных сифилисом первичным в иммуноблоттинге с набором «Лайн-Блот-Сифилис-IgM» позволило сделать общие заключения по результатам тестирования: 2 (2,63%) отрицательных, 9 (10,84%) неопределенных и 65 (85,53%) положительных. Полученные результаты характеризуют клиническую чувствительность исследования в иммуноблоттинге-IgM при первичном сифилисе на уровне 85,53%, что несколько ниже данных литературы по оценке величины этого показателя для метода иммуноблоттинга с использованием IgG (94,8%) у больных всеми формами заболевания [14, 15, 23]. Отрицательные результаты в иммуноблоттинге-IgM были выявлены с 2 образцами сыворотки крови больных первичным сифилисом, в том числе с одним образцом, демонстрировавшим также отсутствие тре-понемоспецифических антител в ИФА^ (КП = 0,03), и с образцом, показавшим в ИФА^ средний уровень антител (КП = 2,75). При этом с обоими образцами сыворотки крови в иммуноблоттинге-IgM были получены результаты, указывавшие на выявление следовых количеств антител класса M (0,3+) к антигенам TmpA + + TpN15 и TmpA + TpN47 соответственно; эти показатели были учтены нами при оценке очередности появления антител к разным антигенам T. pallidum на ранних этапах развития инфекции. Неопределенные результаты в иммуноблоттинге-IgM наблюдали с 9 образцами, включая 2 образца сыворотки крови с низким уровнем IgM по результатам исследования в ИФА^ (1,58 < КП < 3,98), 3 -со средним уровнем (4,67 < КП < 5,88) и 4 с высоким содержанием IgM (11,52 < КП < 15,73). При этом в иммуноблоттинге-IgM в указанных образцах в 2 случаях были определены антитела только к TpN17 (на уровне 0,5+), в 6 к TmpA (от + до +++) и в 1 -к TpN47 (0,5+). Положительные результаты в иммуноблоттинге-IgM были получены с 65 образцами: с 1 образцом, показавшим отрицательный результат исследования в ИФА^ (КП = 0,97), и с 64 образцами, демонстрировавшими в ИФА^: низкий уровень антител (1,20 < КП < 3,45) -4 образца, средний (4,30 < КП < 7,69) 10 и высокий (8,03 < КП < 22,18) 50 образцов. Положительные заключения о результатах исследования в иммуноблоттинге-IgM были установлены при выявлении трепонемоспецифических антител на уровне 0,5+ и более с двумя антигенами одновременно в 14 (21,54%) из 65 исследованных образцов, с тремя антигенами в 30 (46,15%) и с четырьмя антигенами в 21 (32,31%). Полученные в иммуноблоттинге-IgM данные были подвергнуты сравнительному статистическому анализу с целью оценки, к каким именно антигенам из числа включенных в состав иммуносорбента (TpN15, TpN17, TmpA и TpN47) у больных первичным сифилисом определялось наиболее высокое содержание антител. Так как при проведении иммуноблоттинга получить значения оптической плотности невозможно, сравнительный анализ проводили путем обработки цифровых показателей (количеств плюсов), отражавших интенсивность окрашивания полос с нанесенными антигенами T. pallidum и, соответственно, уровень антител к T. pallidum (рис. 1). При этом было установлено, что в каждом конкретном случае наблюдался более высокий уровень антиВестник дерматологии и венерологии В помощь практическому врачу л 67 ■ TmpA ■ TpN47 ■ TpN17 ■ TpN15 р 1 Содержание антител класса м к антигенам . 1. Т. pallidum в сыворотке крови больных первичным сифилисом 2 (2,63%) ■ TmpA ■ TpN47 ■ TpN17 ■ TpN15 Рис. 2. Соотношение профилей гуморального иммунного ответа у больных первичным сифилисом в зависимости от преобладания синтеза антител класса М к антигенам T. pallidum тел только к одному из изучавшихся антигенов; это позволило определить четыре возможных профиля формирования гуморального иммунного ответа. Преобладание антител к антигену TpN15 на уровне + / ++ определено в сыворотке крови 2 (2,63%) из 76 обследованных больных первичным сифилисом, что отражало формирование выраженного гуморального иммунного ответа к этому антигену при менее выраженном ответе на другие антигены в составе набора «Лайн-Блот-Сифилис-ІдМ». Формирование профиля с преобладанием содержания антител к антигену TpN17 на уровне + / ++++ определялось у 17 (22,37%) пациентов; к антигену TmpA на уровне 0,3+ / ++++ у 50 (65,79%); к TpN47 с интенсивностью 0,3 +/++++у 7 (9,21%) пациентов (рис. 2). Отсутствие IgM к антигену TpN15 в иммуноблот-тинге определено у больных первичным сифилисом в 21 (28,63%) случае, наличие следовых значений (0,3+) в 28 (36,84%) и положительные результаты (от 0,5+ до ++) в 27 (35,53%) случаях. Отсутствие антител к антигену TpN17 было установлено в 7 (9,21%) образцах сыворотки крови, выявление следовых значений (0,3+) в 15 (19,74%) и положительные результаты (от 0,5+ до ++++) в 54 (71,05%). при исследовании специфических антител к антигену TmpA отрицательные значения не наблюдали (0%), следовые уровни антител (0,3+) были установлены в 7 (9,91%) образцах и положительные результаты (от 0,5+ до ++++) в 69 (90,79%). В иммуноблоттинге-IgM антитела к антигену TpN47 не были выявлены у 7 (9,21%) больных первичным сифилисом, следовые значения наличия антител (0,3+) определены у 12 (15,79%) и положительные результаты (от 0,5+ до ++++) у 57 (75,00%) пациентов (табл. 1). Средние показатели содержания антител (M ± m) составили для антигенов TpN15, TpN17, TmpA и TpN47 соответственно 0,4 ± 0,03; 1,0 ± 0,1; 1,9 ± 0,1 и 0,9 ± 0,1 (рис. 3). Антиген TmpA является периплазматическим белком, участвующим в транспорте металлов через цитоплазматическую мембрану клетки T. pallidum; TpN17 «величайший мембранный белок» липо-протеин, высокое содержание его обнаруживается во внутренней мембране протоплазматического комплекса, и в небольших количествах он присутствует в структуре наружной мембраны; TpN47 фермент (цинкзависимая карбоксипептидаза), который относится также к пенициллинсвязывающим белкам, в больших количествах продуцируется патогенной Т. pallidum. Белок TpN15 выявляется в структуре наружной мембраны T. pallidum ssp. pallidum, а также ssp. pertenue (возбудитель фрамбезии), но не обнаруживается у непатогенной T. pallidum biotype Reiter [12, 24-27]. 68 L № 4, 2013 Таблица 1 Результаты определения в иммуноблоттинге антител класса M к антигенам Т. pallidum у больных сифилисом первичным Результаты выявления антител к антигенам, абс. (%) rejyjibidibi иооледивсшия TpN15 TpN17 TmpA TpN47 Отрицательный, 21 (27,63) 7 (9,21) 0 (0) 7 (9,21) Отрицательный, 0,3+ («следовые» антитела) 28 (36,84) 15 (19,74) 7 (9,21) 12 (15,79) Всего 49 (64,47) 22 (28,95) 7 (9,21) 19 (25,00) Положительный, 0,5+ 19 (25,00) 18 (23,68) 6 (7,90) 16 (21,05) Положительный, + 6 (7,90) 19 (25,00) 19 (25,00) 27 (35,53) Положительный, ++ 2 (2,63) 9 (11,84) 20 (26,32) 10 (13,15) Положительный, +++ 0 (0) 5 (6,58) 13 (17,10) 3 (3,95) Положительный, ++++ 0 (0) 3 (3,95) 11 (14,47) 1 (1,32) всего 27 (35,53) 54 (71,05) 69 (90,79) 57 (75,00) Итого 76 (100) 76 (100) 76 (100) 76 (100) Общими свойствами изучавшихся антигенов T. pallidum являются: локализация в структуре мембран наружной клеточной стенки или протоплазма-тического комплекса, а также их высокое содержание в клетке. Эти характеристики, вероятно, обеспечивают более раннее распознавание указанных соединений в качестве чужеродных антигенов анти-генпредставляющими клетками и представление их иммунокомпетентным клеткам в региональных лимфатических узлах организма хозяина, что обусловливает более раннее начало и выраженность синтеза антител к этим антигенам. Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что у больных первичным сифилисом исследование в иммуноблоттинге-IgM имеет клиническую чувствительность на уровне 85,53%. Первичный гуморальный иммунный ответ при участии IgM различной степени выраженности на антиген Tm-pA выявляли в 100% случаев, на TpN47 и TpN17 -по 90,79%, а на TpN15 только в 72,37% случаев. На начальных этапах развития сифилиса показано преобладание выработки антител, направленных преимущественно к какому-либо одному из четырех изучавшихся антигенов. Так, приоритет антителообра-зования у больных сифилисом первичным на антиген TmpA наблюдали в 65,79% случаев, в то время как максимальную выраженность иммунного ответа к другим антигенам отмечали существенно реже: к TpN17 в 22,37%, к TpN47 в 9,21% и к TpN15 -в 2,63% случаев. Полученные данные позволили предположить, что на начальном этапе развития инфекции в подавляюTpN47 TpN15 4,0. TpN17 TmpA IgG IgM Рис. 3. Средние показатели содержания антител классов М и G к четырем антигенам T. pallidum, рассчитанные для следовых (0,3+) и положительных (от 0,5+ до ++++) результатов Вестник дерматологии и венерологии В помощь практическому врачу л 69 щем большинстве случаев у больных сифилисом формирование гуморального иммунного ответа происходит к антигену ТтрА как к обладающему максимально выраженной иммуногенностью, в связи с чем содержание антител к нему в сыворотке крови превалирует над уровнем антител к трем другим изучавшимся антигенам Т. pallidum. По мере развития заболевания у больных начинается синтез антител к антигенам TpN47 и TpN17 при существенном отставании продукции антител кТр1М15. Определение трепонемоспецифических антител класса G Исследование 76 образцов сыворотки крови больных сифилисом первичным в иммуноблоттин-ге с набором «Лайн-Блот-Сифилис-lgG» позволило получить общее заключение по результатам определения антител класса G к антигенам Т. pallidum: 1 (1,31%) отрицательных, 5 (6,58%) неопределенных и 70 (92,11%) положительных результатов. Полученные данные показали более высокую клиническую чувствительность иммуноблоттинга-lgG (92,11%) в сравнении с иммуноблоттингом-IgM (85,53%). Отрицательное заключение в иммуноблоттинге-IgG было сделано по результатам исследования 1 образца сыворотки крови, так как в данном образце не было выявлено даже следовых значений содержания антител ни к одному из четырех изучавшихся антигенов. С этим образцом отрицательные результаты были также получены в ИфА^ (Кп = 0,03) и иммуноблоттинге-IgM (по отношению к TmpA и TpN15 по 0,3+). Неопределенные результаты в иммуноблоттинге-IgG наблюдали с 5 образцами сыворотки крови: одним образцом, показавшим положительный результат в ИфА^ (со средним уровнем антител, Кп = 2,75) и отрицательный в иммуноблоттинге-IgM (по отношению к TmpA и TpN47 по 0,3+), и с четырьмя образцами сыворотки с положительными результатами исследования в ИфА^ (два образца сыворотки со средним содержанием IgM, Кп = 4,75 и 5,87 соответственно и 2 с высоким содержанием IgM, Кп = 9,82 и 16,71 соответственно) и иммуноблоттинге-IgM. В образцах с неопределенными результатами исследования в иммуноблоттинге-IgG в 3 случаях выявляли антитела к TmpA и в 2 случаях к TpN47. положительные результаты в иммуноблоттинге-IgG были получены с 70 образцами, в том числе: с одним образцом, показавшим отрицательный результат исследования в ИфА^ (Кп = 0,97) и положительный в иммуноблоттинге-IgM, с 7 образцами, демонстрировавшими в ИфА^ положительные результаты и неопределенные в иммуноблоттинге-IgM, и с 62 образцами с положительными результатами исследования как в ИфА^, так и в иммуноблоттинге-IgM. положительные заключения о результатах исследования в иммуноблоттинге-IgG были установлены при выявлении в образцах антител к двум антигенам і ■ TmpA ■ TpN47 ■ TpN17 ■ TpN15 Содержание антител класса G рис. 4. (в усл. ед. плюсах) к антигенам Т. pallidum в сыворотке крови 76 больных первичным сифилисом T. pallidum на уровне 0,5+ и более в 9 (12,86%) из 70 случаев, с тремя антигенами в 18 (25,71%) и с четырьмя антигенами в 43 (61,43%) случаях. Результаты исследования в иммуноблоттинге-IgG также были сопоставлены с целью определения приоритетов антителообразования к изучавшимся антигенам возбудителя заболевания (рис. 4). превалирование гуморального ответа изолированно на антиген TpN15 по сравнению с другими антигенами, нанесенными на стрипы в составе набора «Лайн-Блот-Сифилис-IgG», не наблюдали ни в одном случае (0%) из 76 обследованных больных сифилисом первичным. по максимальной выраженности образования антител класса G у больных первичным сифилисом было выделено 6 возможных профилей гуморального иммунного ответа: 1) наиболее высокое содержание антител только к антигену TpN17 на уровне ++++ в 3 (3,95%) случаях; 2) наиболее высокое содержание антител только к антигену TmpA на уровне + / ++++ в 32 (42,10%) случаях; 3) наиболее высокое содержание антител только к антигену TpN47 на уровне 0,5+ / ++ в 3 (3,95%) случаях; 70 к. № 4, 2013 4) наиболее высокое содержание антител к двум антигенам одновременно (TpN17 и TmpA) на уровне ++ / ++++ в 10 (13,16%) случаях; 5) наиболее высокое содержание антител к двум антигенам одновременно (TmpA и TpN47) на уровне ++ / ++++ в 14 (18,42%) случаях; 6) наиболее высокое содержание антител к трем антигенам одновременно (TpN17, TmpA и TpN47) на уровне ++ / ++++ в 14 (18,42%) случаях (рис. 5). Отсутствие антител к антигену TpN15 у больных первичным сифилисом наблюдали в 20 (26,31%) случаях, следовые значения (0,3+) выявили в 12 (15,79%) и положительные результаты (от 0,5+ до ++) в 44 (57,90%) случаях. Отсутствие антител к антигену TpN17 было установлено в 8 (10,53%) образцах сыворотки крови, следовые значения (0,3+) в 8 (10,53%) и положительные результаты (от 0,5+ до ++++) в 60 (78,95%). При исследовании специфических антител к антигену TmpA отрицательные значения наблюдали в 1 (1,32%) случае, следовые уровни (0,3+) в 2 (2,63%) и положительные (от 0,5+ до ++++) в 73 (96,05%) случаях. Антитела к антигену TpN47 не были выявлены у 2 (2,63%) больных первичным сифилисом, следовые значения (0,3+) наблюдали у 3 (3,95%) и положительные результаты (от 0,5+ до ++++) у 71 (93,42%) пациента (табл. 2). 1 табли а 2 Результаты определения в иммуноблоттинге антител класса G к антигенам Т. pallidum у больных | ц сифилисом первичным Результаты исследования Результаты выявления антител к антигенам, абс. (%) TpN15 TpN17 TmpA TpN47 Отрицательный, 20 (26,31) 8 (10,53) 1 (1,32) 2 (2,63) Отрицательный, 0,3+ 12 (15,79) 8 (10,53) 2 (2,63) 3 (3,95) всего 32 (42,10) 16 (21,05) 3 (3,95) 5 (6,58) Положительный, 0,5+ 13 (17,11) 2 (2,63) 0 (0) 7 (8,22) Положительный, + 12 (15,79) 13 (17,11) 4 (5,26) 10 (13,15) Положительный, ++ 12 (15,79) 17 (22,37) 21 (27,63) 24 (31,58) Положительный, +++ 7 (9,21) 9 (11,84) 19 (25,00) 16 (21,05) Положительный, ++++ 0 (0) 19 (25,00) 29 (38,16) 14 (18,42) всего 44 (57,90) 60 (78,95) 73 (96,05) 71 (93,42) Итого 76 (100) 76 (100) 76 (100) 76 (100) 14 (18,42%) 14 (18,42%) 32 (41,10%) 10 (13,16%) 3 (3,95%) 3 (3,95%) TmpA TpN47 TpN17 TpN17+TmpA TmpA+TpN47 TpN17+TmpA+TpN47 Рис. 5. Соотношение профилей гуморального иммунного ответа у больных первичным сифилисом в зависимости от преобладания синтеза антител класса G к антигенам T. pallidum Вестник дерматологии и венерологии В помощь практическому врачу л 71 Средние показатели (M±m) содержания IgG антител составили: для антигенов TpN15, TpN17, TmpA и TpN47 соответственно: 0,9 ± 0,1; 2,0 ± 0,1; 2,9 ± 0,1 и 2,2 ± 0,1 (рис. 3). Как следует из диаграммы, представленной на рис. 3, у больных на начальных этапах развития сифилитической инфекции наблюдалась высокая степень аналогии в приоритетах (последовательности появления и выраженности) синтеза антител классов М и G к антигенам, включенным в исследование. при этом интенсивность гуморального ответа с участием антител класса G превосходила таковую с участием антител класса М; в ряде случаев наблюдалось нивелирование разницы в количестве выявляемых антител по отношению к разным антигенам T. pallidum путем «выравнивания» интенсивности гуморального ответа по верхней границе (++++), определяемой методом иммуноблоттинга. Высокий уровень антителообразования с участием IgG при первичном сифилисе обеспечивал более высокий показатель клинической чувствительности иммуноблоттинга-IgG по сравнению с иммуноблоттингом-IgM (92,11 и 85,53% соответственно). Таким образом, данные проведенного исследования позволили установить, что в подавляющем большинстве случаев при первичном сифилисе гуморальный ответ с участием антител класса M к антигенам T. pallidum сочетается с выработкой антител класса G. У больных первичным сифилисом преобладала частота выявления и интенсивность образования антител класса G к антигенам TmpA и TpN47 в 98,68% (M±m = 2,9±0,1) и 97,37% (M±m = 2,2±0,1) случаев соответственно, по сравнению с которыми менее часто и несколько слабее был выражен синтез антител к антигенам TpN17 -в 89,47% (M±m = 2,0±0,1) и к TpN15 в 73,69% (M±m = 0,8±0,1) случаев. Заключение проведенное исследование сыворотки крови больных первичным сифилисом с применением метода иммуноблоттинга позволило изучить последовательность обнаружения антител к отдельным антигенам T. pallidum на ранних этапах развития инфекционного процесса: ■ впервые выявлены и охарактеризованы разные профили первичного гуморального ответа с уча стием антител класса М, различающиеся более выраженным синтезом антител к какому-либо одному антигену T. pallidum: максимальную выраженность иммунного ответа наблюдали на антиген TmpA у 65,79% больных при значении содержания антител (M ± m) 1,9 ± 0,1 (условных единиц), на TpN17 у 22,37% (M ± m = 1,0 ± 0,1), на TpN47 -у 9,21% (M ± m = 0,9 ± 0,1) и на TpN15 у 2,63% (M ± m = 0,4 ± 0,1); ■ частота определения в сыворотке крови больных первичным сифилисом антител класса М составила: к антигену TmpA 100% случаев, к TpN47 и TpN17 -по 90,79% и к TpN15 только 72,37% случаев; ■ в подавляющем большинстве случаев при первичном сифилисе гуморальный ответ с участием антител класса M сочетался с выработкой антител класса G; при этом содержание в крови антител класса G к каждому из четырех изученных антигенов T. pallidum более чем в 2 раза превосходило уровень антител класса M; ■ охарактеризована частота выявления в сыворотке крови трепонемоспецифических антител класса G: к антигену TmpA у 98,68% больных, к TpN47 -у 97,37%, к TpN17 у 89,47% и к TpN15 у 73,69%; ■ выраженность гуморального ответа с участием антител класса G по отношению к разным антигенам повторяет последовательности, установленные в отношении антител класса М: приоритет иммунного ответа на антиген TmpA наблюдали в 42,10% случаев (M ± m = 1,9 ± 0,1), на TpN17 -в 3,95% (M ± m = 2,0 ± 0,1), на TpN47 в 3,95% (M ± m = 2,2 ± 0,1), одновременно на TpN17 и TmpA в 10,16% случаев, одновременно на TmpA и TpN17 в 18,42%, одновременно на TpN17, TmpA и TpN47 в 18,42%. Клиническая чувствительность иммуноблоттинга при диагностике первичного сифилиса составила: при выявлении специфических антител к T. pallidum класса M -85,53%, а при определении антител класса G 92,11%. Авторы выражают признательность руководителям ЗАО «ЭКОлаб» (г. Электрогорск Московской области, Россия) и ООО «Научно-производственное объединение «Диагностические системы» (Нижний Новгород, Россия) за предоставленные для проведения настоящего исследования диагностические наборы реагентов. I

About the authors

S V Rotanov

State Research Center of Dermatovenereology and Cosmetology, Ministry of Healthcare of the Russian Federation

Email: rotanov@cnikvi.ru

F A Ermatova

The Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov (RNRMu)


References

  1. Kashkin K.P. Immunologicheskie issledovaniya v klinike infektsionnykh zabolevaniy. Novosti prikladnoy immunologii i allergologii 2004; 8: 1-10. [Кашкин К.П. Иммунологические исследования в клинике инфекционных заболеваний. Новости прикладной иммунологии и аллергологии 2004; 8: 1-10.]
  2. Yarilin A.A. Immunologiya. M: GEOTAR-Media, 2010. [Ярилин А.А. Иммунология. М: ГЭОТАРМедиа, 2010.]
  3. Merlin S., Andre J., Alacoque B. et al. Importance of specific IgM antibod-ies in 116 patients with various stages of syphilis. Genitourin Med 1985; 61 (2): 82-87.
  4. Lyakhov V.F., Borisenko K.K., Potekaev N.S i dr. Dinamika treponemospetsificheskoy immunoglobulinemii pri rannikh formakh sifilisa. Vestn dermatol i venerol 1990; 8: 38-42.
  5. Ляхов В.Ф., Борисенко К.К., Потекаев Н.С и др. Динамика трепонемоспецифической иммуноглобулинемии при ранних формах сифилиса. Вестн дерматол и венерол 1990; 8: 38-42.
  6. Muller F., Hagedorn H.J. Syphilis. In: Thomas L. (Editor) Clinical Labora-tory Diagnostics. TH Books Frankfurt, 1998: 1203-1212.
  7. Haake D.A.; Spirochaetal lipoproteins and pathogenesis. Microbiology 2000; 146 (7): 1491-1504.
  8. Brinkman M.B., Mckevitt M., Mcloughlin M. et al. Reactivity of antibodies from syphilis patients to a protein array representing the Treponema pallidum proteome. J Clin Microbiol 2006; 44 (3): 888-891.
  9. McGill M.A., Edmondson D.G., Carroll J.A. et al. Characterization and Serologic Analysis of the Treponema pallidum Proteome. Infect Immun 2010; 78 (6): 2631-2643.
  10. Rotanov S.V., Khayrullin R.F., Frigo N.V. Izuchenie proteoma T. pallidums tsel'yu sovershenstvovani-ya laboratornykh issledovaniy dlya diagnostiki sifilisa. Vestn dermatol i venerol 2012; 4: 10-15. [Ротанов С.В., Хайруллин Р.Ф., Фриго Н.В. Изучение протеома T. pallidum с целью совершенствования лабораторных исследований для диагностики сифилиса. Вестн дерматол и венерол 2012; 4: 10-15.]
  11. Egglstone S.I., Turner A.J. PHLS Syphilis Serology Working Group. Commun Dis Public Health 2000; 3 (3): 158-162.
  12. Goh B.T. Syphilis in adults. Sex Transm Infect 2005; 81: 448-452.
  13. Sena A.C., White B.L., Sparling P.F. Novel Treponema pallidum serologic tests: a paradigm shift in syphilis screening for the 21st century. Clin Infect Dis 2010; 51: 700-708.
  14. Ho E.L., Lukehart S.A. Syphilis: using modern approaches to understanding an old disease. J Clin Invest 2011; 121 (12): 4584-4592.
  15. Kubanova A.A., Frigo N.V., Rotanov S.V. i dr. Opyt ispol'zovaniya metoda immunoblottinga dlya diagnostiki sifilisa. Vestn dermatol venerol 2006; 2: 4-11. [Кубанова А.А., Фриго Н.В., Ротанов С.В. и др. Опыт использования метода иммуноблоттинга для диагностики сифилиса. Вестн дерматол и венерол 2006; 2: 4-11.]
  16. Frigo N.V., Rotanov S.V., Nesterenko V.G. i dr. Rezul'taty izucheniya diag-nosticheskoy effektivnosti novoy test-sistemy lineynogo immunofermentnogo analiza «Inno-Lia™ Syphilis Score». Klin lab diagn 2006; 3: 36-41. [Фриго Н.В., Ротанов С.В., Нестеренко В.Г. и др. Результаты изучения диагностической эффективности новой тест-системы линейного иммуноферментного анализа «Inno-Lia™ Syphilis Score». Клин лаб диагн 2006; 3: 36-41.]
  17. Chepurchenko N.V., Gladysheva M.V., Obryadina A.P. Novye vozmozhnosti ispol'zovaniya rekombinantnykh antigenov v serodiagnostike sifilisa. Klin dermatol venerol 2006; 2: 28-31. [Чепурченко Н.В., Гладышева М.В., Обрядина А.П. Новые возможности использования рекомбинантных антигенов в серодиагностике сифилиса. Клин дерматол венерол. 2006; 2: 28-31.]
  18. Gomez E., Jespersen D.J., Harring J.A., Binnicker M.J. Evaluation of the Bio-Rad BioPlex 2200 syphilis multiplex flow immunoassay for the detection of IgMand IgG-class antitreponemal antobodies. Clin Vaccine Immunol 2010, 17 (6): 966-968.
  19. Rotanov S.V., Osmanova S.R. Primenenie immunokhromatograficheskikh issledovaniy dlya diagnostiki sifiliticheskoy infektsii. Sovrem probl dermatovenerol immunol vrach kosmetol 2011; 5: 16-23. [Ротанов С.В., Османова С.Р. Применение иммунохроматографических исследований для диагностики сифилитической инфекции. Соврем пробл дерматовенерол иммунол врач косметол 2011; 5: 16-23]
  20. Rotanov S.V., Frigo N.V., Manuk'yan T.E. i dr. Otsenka klinicheskoy informativnosti metoda immunokhemilyuminestsentsii pri diagnostike sifi-liticheskoy infektsii. Vestn dermatol i venerol 2012; 1: 49-55. [Ротанов С.В., Фриго Н.В., Манукьян Т.Е. и др. Оценка клинической информативности метода иммунохемилюминесценции при диагностике сифилитической инфекции. Вестн дерматол и венерол 2012; 1: 49-55.]
  21. Frigo N.V., Rotanov S.V., Manuk'yan T.E. i dr. Laboratornaya diagnostika sifilisa: vchera, segodnya, zavtra. Vestn dermatol i venerol 2012; 4: 16-23. [Фриго Н.В., Ротанов С.В., Манукьян Т.Е. и др. Лабораторная диагностика сифилиса: вчера, сегодня, завтра. Вестн дерматол и венерол 2012; 4: 16-23.]
  22. Prikaz Minzdrava Rossii № 327 ot 25.07. 2003 goda «Ob utverzhdenii Protokola vedeniya bol'nykh «SIFILIS»». [Приказ Минздрава России № 327 от 25.07. 2003 года «Об утверждении Протокола ведения больных “Сифилис”».]
  23. Klinicheskie rekomendatsii po vedeniyu bol'nykh infektsiyami, peredavaemymi polovym putem, i urogenital'nymi infektsiyami (Russian Public Organization «Russian Society of Dermatovenerologists and Cosmetologists»). Pod red. A.A. Kubanovoy. M: «DELOVOY EKSPRESS», 2012: 34-68. [Клинические рекомендации по ведению больных инфекциями, передаваемыми половым путем, и урогенитальными инфекциями (Российское общество дерматовенерологов и косметологов). Под ред. А.А. Кубановой. М: «ДЕЛОВОЙ ЭКСПРЕСС», 2012: 34-68.]
  24. Hagedorn H.J., Kraminer-Hagedorn A., De Bosschere K. et al. Evaluation of INNO-LIA syphilis assay as a confirmatory test for syphilis. J Clin Microbiol 2002; 40(3): 973-978.
  25. LaFond R.E., Lukehart S.A. Biological basis for syphilis. Clin Microbiol Rev 2006; 19(1): 29-49.
  26. Tomson F.L., Conley P.G., Norgard M.V., Hagman K.E. Assessment of cellsurface exposure and vaccinogenic potentials of Treponema pallidum candidate outer membrane proteins. Microbes Infect 2007; 9 (11): 1267-1275.
  27. Cox D.L., Luthra A., Dunham-Ems S. et al. Surface immunolabeling and consensus computational framework to identify candidate rare outer membrane pro-teins of Treponema pallidum. Infection Immun 2010; 78 (12): 5178-5194.
  28. Lazarev V.N., Shkarupeta M., Levitski S. i dr. Ekspressiya potentsial'nykh antigenov T. pallidum v E. coli. Biotekhnologiya. Teoriya i praktika 2010; 4: 80-87. [Лазарев В.Н., Шкарупета М., Левицки С. и др. Экспрессия потенциальных антигенов T. pallidum в E. coli. Биотехнология. Теория и практика 2010; 4: 80-87.]

Statistics

Views

Abstract - 671

PDF (Russian) - 3292

PlumX

Article Metrics

Metrics Loading ...

Dimensions

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2013 Rotanov S.V., Ermatova F.A.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies